생물학 실험 - Fungal Genomic DNA 분리(콩 DNA 관찰)

생물학 실험 - Fungal Genomic DNA 분리(콩 DNA 관찰)

생물학 실험 - Fungal Geno.hwp

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설명 : DNA는 핵산의 일종으로 유전자의 본체다. 핵산은 뉴클레오티드(nucleotide)라고 하는 단위물질이 많이 연결된 고분자 유기물이다. 이 뉴클레오티드는 염기, 탄수화물의 일종인 펜토오스(pentose), 그리고 인산이 각 한 분자씩 결합하여 구성된 것인데, 펜토오스가 디옥시리보오스(deoxyribose)이면 DNA(디옥시리보핵산)라고 하고, 리보오스이면 RNA(리보핵산)라고 구별하여 부른다.

1. sample 채취  발아 후 3주(이 동안은 chemical 처리를 하면 안된다.)정도 경과한 식물체(콩)에서 초생엽만 채취(마쇄 후 약 15ml정도)한다. → 소봉투의 1/3정도. 채취한 sample은 liquid nitrogen이나 아이스박스를 이용하여 실험실로 이동한다. 즉 시료를 종이봉투에 담아서 액체 질소에 적셔 액체질소가 담긴 통속에서 보관하여 실험실로 이동한다. 만약에 즉시 실험에 들어가지 않을 경우 -90℃의 냉동고에 냉동 보관한다.  2. Sample 마쇄  준비물 : 50ml disposable centrifuge tube, 유발, 유봉, 시약수저, 핀셋.  isolation 하기 전에 미리 항온수조에 60℃로 setting해 둔다.  유발을 미리 액체질소로 냉각시켜둔다. tube에는 미리 labeling을 해둔다. (냉각시킨 후에는 labeling이 되지 않는다.) 시료를 넣고 액체질소를 첨가한 후 천천히 마쇄한다.(연녹색, 하얀 분말이 될 정도로 마쇄한다.)  50ml sample tube를 액체질소로 한번 세척한 후에 마쇄한 sample(10ml)를 넣는다. 이때에 튜브의 뚜껑은 느슨하게 잠근다. 반드시 주의할 것은 sample tube는 사용전에 -90℃ 냉동고에 보관한다.  3. CTAB buffer첨가  sample의 양이 10ml일 때, 약 15ml 정도의 CTAB buffer량을 15ml정도의 양을 넣어서 천천히 흔들어 준다.  잘 풀리지 않을 경우 봉을 넣어서 저어주고 뚜껑을 꽉 막아준다. sample tube를 60-65℃의 water bath에 1시간～1시간 30분 동안 incubation한다. (5-10분 동안 슬며시 흔들어준다.) -> 상온에서 식힌다.  4. 불순물 제거  Tube의 sample용액과 똑같은 부피의 chloroform / isoamyl alcohol(24/1)을 첨가한 후 5-10분간 섞어준다.  이 과정은 protein, lipid등과 같이 DNA사슬에 붙어있는 불순물을 제거하는 역할을 한다.

출처 : 해피레포트 자료실